Cells
02 \ 细胞收集指南
转录组
一、基因芯片
1. RNA
1.1. 细胞培养结束后，去除培养液；
1.2. 加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除 PBS 缓冲液；
1.3. 按每 10 cm2 （相当于六孔板一个孔或 35mm 直径培养皿） 细胞加 1mL TRIzol （悬
浮细胞以每 5*106 个细胞加入 1mL TRIzol）试剂的比例加入 TRIzol 试剂；
1.4. 使用玻璃滴管（或移液器Tip头）反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之
充分溶解于 TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体；
1.5. 将 TRIzol 液体全部转移到 RNase-free 的试管中；
1.6. 放入-80℃冰箱中保存。
2. MiRNA
2.1. 贴壁细胞培养诱导结束后，去除培养液；
2.2. 加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除 PBS 缓冲液；
2.3. 按每 105 - 107的细胞加入 600μl Lysis/Binding Solution；
2.4. 使用移液器 Tip 头反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块， 使之充分溶解于裂
解液中形成清亮不粘稠的液体；
2.5. 将液体全部转移到 RNase-free 的试管中；
2.6. 放入-80℃冰箱中保存。
二、RNA-seq
1. 细胞培养结束后，去除培养液；
2. 加入适量的 PBS 缓冲液冲洗一次，彻底去除 PBS 缓冲液；
3. 按每 10 cm2 （相当于六孔板一个孔或 35mm 直径培养皿） 细胞加 1mL TRIzol （悬
浮细胞以每 5*106 个细胞加入1mL TRIzol）试剂的比例加入 TRIzol 试剂；
4. 使用玻璃滴管（或移液器 Tip 头）反复吹打细胞，直至看不见成团的细胞块，使之
充分溶解于 TRIzol 中形成清亮不粘稠的液体；
5. 将 TRIzol 液体全部转移到 RNase-free 的试管中；
6. 放入-80℃冰箱中保存。
三、RIP-seq/qPCR
提供1E7-2E7细胞
收样标准（贴壁细胞）
1) 弃掉培养液，并将培养皿倒置于吸水纸上吸干培养液
2) 加入4℃预冷的PBS，平放轻轻摇动1分钟洗涤细胞，然后弃去PBS。 重复以上操作两次以洗去培养液。
3) 将培养皿置于冰上。向培养皿内加入4℃预冷的PBS。用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧。移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内。1000g，10分钟离心，去掉上清。
4) 液氮速冻，-80℃保存，干冰送样
收样标准（悬浮细胞）
1) 1000g离心10分钟收获细胞，弃上清。
2) 用预冷的PBS小心洗涤片状沉淀物2次，置于冰上，去上清。
3) 液氮速冻，-80℃保存，干冰寄送